Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1M-糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到去甲自身特异性到注意到1型式乳癌药理学症状的成果率在成年人时期就有很好的描绘出，多个去甲自身特异性阴性的成年人中的有70%在小鼠转换后10年内患上乳癌，而随访15年的成年人这一数量增高到84%。相比之下，分之二药理学1型式乳癌一半以上的型式1型式乳癌的病症机制还没有给与充分的生物信息学。

愈来愈多的人开始用到分期系统来定义1型式乳癌的成果：个体在注意到多种去甲自身特异性时进到第1前期，注意到血糖精神状态时进到第2前期，注意到症状时进到第3前期。一些多发去甲自身特异性阴性的个体，在1期和2期，成果较快，并发展为病症的1型式乳癌。我们之前描绘出了一三组在首次扫描到多种去甲自身特异性取样后至少10年无乳癌的极快成果者，这三组患儿人数少，但相异之处非常清楚。随后，我们发现去甲自身蛋白特异性CD8+T巨噬细胞反应在成果很快的患儿中的前提不存在，但在更进一步病症和起因于的乳癌患儿中的很容易扫描到。这可能说明了，与成果患儿相比，这些患儿自身免疫反应的平衡增强。

早期生物信息学说明了，尽管平衡性T巨噬细胞(Treg)需求量正常，但乳癌患儿存在一些功能缺陷，其中的之外对IL-2的反应战斗能力减少。此外，乳癌患儿中的的波动CD4+T巨噬细胞可能对平衡凸显抵抗性，表现为波动T巨噬细胞的消除减弱，自然消除的Treg和游离消除的正向Treg，以及蛋白境况的CD4+T巨噬细胞中的IL-2反应减弱。本生物信息学的目的是描绘出了CD4+平衡性T巨噬细胞(Treg)在一小群极很快成果者中的的相异之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX生物信息学是一项以许多人为基础的斜向生物信息学，在21岁以下确诊的患儿亲属中的检查和1型式乳癌的致命因素。我们之前描绘出了长期很快成果者的相异之处，他们保持多重去甲自身特异性阴性有约10年，但没有注意到乳癌的药理学症状，快性或非完成性自身免疫。随后，10名继续保持无乳癌并主动提供大量体液取样的很快成果者扩及T和B巨噬细胞功能归纳。在现前期的生物信息学中的，8名快成果者(SP三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身特异性阴性。所有的举例来说都受制于1型式乳癌成果的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身特异性对某些蛋白的阴性反应，然而，一名患儿已经受制于2期至少6年，但没有注意到药理学症状，一名患儿被诊断为乳癌，该病患72岁，在采集实验取样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中的对该NAD完成了单独评估。裂解外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞消除试验评估NAD中的Treg的频谱、表现型式和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)完成无指派聚类归纳，评估Treg表现型式。

结果：与健康NAD相比，来自快成果体的失忆CD4+T巨噬细胞的指派聚类说明了，激活的失忆CD4+ Treg频谱增高，与止痛药正向的TNFR相关蛋白(GITR)表述增高有关。一名HbA1c增大的患儿与成果很快者和匹配的对照三组相比，Treg谱大致相同。功能归纳说明了，与健康NAD相比，来自很快成果体的Treg介导的CD4+波动T巨噬细胞消除明显受损。表现为对波动CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的消除增高。

上图1 深入的表现型式归纳说明了，CD4+Treg亚型式在快成果队列中的增高。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标上物表述比对出10个元簇:失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)用到9个相异Treg标上分解成的10个元簇的MST。每个端口代表一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在端口三组周边上色。每个端口中的的饼上图说明单个标上的表述级别。(b)每个元聚类的热上图，以说明了整体标上表述。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)分解成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于金属量为每个metacluster箱终点站上图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP三组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T巨噬细胞(l)。深蓝色圆圈代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一小写秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用到CITRUS的预测模型式声称，Treg频谱的增高是成果很快的标志。分级制度依赖型(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的权威性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR表述完成裂解，模拟器FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(布氏)三组以及NADSP 606(深蓝色)中的CD25+ cd127的频谱简介上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型集合的箱终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)棉花簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度可视，斜线突出的簇被识别为SP和HD队列之间的相异。(j)箱终点站上图说明了了在SP(布氏)和HD(灰点)三组中的，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对于金属量(数量)。(k)直方上图说明了每个簇的表现型式(粉红色)和Treg标上相对于表述与背景表述(红色);上列，线程Treg_3;下面一行，线程Treg_4。背景与所有其他簇中的标上的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一小写秩检验

上图3 与健康献血者相比，成果很快者失忆treg的GITR增高。每个失忆CD4+T巨噬细胞元簇(失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表述标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热上图(sp606不之外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表述结合，说明了直方上图(c)和简介上图(d)。Wilcoxon一对一小写秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有NAD之外，p< 0.05(红色)NADSP 606和匹配的HD不之外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR表述，从分级制度依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)结合，说明了直方上图(e)和简介上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一小写秩检验

上图4 来自很快成果的CD4+ treg巨噬细胞操控波动CD4+T巨噬细胞的战斗能力减少。SP三组用红色的终点站和圆圈说明，HD三组用金色的终点站和圆圈说明，深蓝色的终点站/圆圈说明NADsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标上为CFSE, Treg按辨别的数量滴定。用抗CD3 /28微珠还原巨噬细胞，培养出来3天后完成流式巨噬细胞术扫描。(a-d)与CD4+这样的话者相对于应的treg培养出来(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养出来。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。用到阴性对照(激活的响应巨噬细胞不含treg)计算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 波动CD4+T巨噬细胞对很快成果的T巨噬细胞还原的消除更引人注目。SP三组用红色的终点站和圆圈说明，HD三组用金色的终点站和圆圈说明，深蓝色的终点站/圆圈说明NADsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标上，treg按辨别的数量滴定。用抗CD3 /28微珠还原巨噬细胞，培养出来3天后完成流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养出来。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE消除百分率(b)。(c,d) CD25消除百分率(c)和CD134消除百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来中的的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们证明了的论证是，来自很快成果子的还原失忆CD4+Treg在GITR表述中的给与了扩展和丰富，强调了促使生物信息学Treg在1型式乳癌危险性个体中的的异质性的必要。

注解出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28